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ELISA 板選購指南:告別實(shí)驗“坑”

發(fā)布時(shí)間:2024-06-06     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗,其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過(guò)物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入待檢標本,通過(guò)酶標物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標記技術(shù)(包含免疫熒光技術(shù),免疫放射技術(shù),免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù))中的一種,已廣泛應用于科研和臨床實(shí)驗中,具有快速、定性或者定量甚至定位的特點(diǎn)。

  酶標板作為ELISA實(shí)驗輔助的器材,起著(zhù)舉足輕重的作用。正確使用酶標板可以提高ELISA實(shí)驗最終結果。因此,選擇一款抗原/抗體吸附靈敏度高、對抗原/抗體吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標板產(chǎn)品,是實(shí)驗者獲得可靠、穩定實(shí)驗結果的保障!如何選擇呢?今天,上海通蔚生物帶大家從酶標板材質(zhì)、孔型和顏色等分類(lèi)詳細介紹。


圖1 酶標板

  酶標板材質(zhì)


  酶標板根據材質(zhì)劃分,可以分為聚苯乙烯(PS)、聚丙烯(PP)和其他材質(zhì)(如聚碳酸酯(PC)等,具有特殊的物理或化學(xué)性質(zhì))。

  聚苯乙烯(PS)或許對大多數實(shí)驗小伙伴們比較了解,這種材質(zhì)是實(shí)驗使用比較廣泛的材質(zhì)。聚苯乙烯具有疏水性,但可以通過(guò)進(jìn)行表面處理或涂層來(lái)改變其性質(zhì),以適應不同應用的不同要求,其特性使其最適合顯微成像和光學(xué)測量。

  聚苯乙烯由脂肪族碳鏈和懸垂的間歇性苯環(huán)組成。這提供了非常疏水的表面,這種類(lèi)型的微孔板通常被稱(chēng)為“中等結合”微孔板。關(guān)于中等結合,我下文會(huì )講到。

  可以通過(guò)表面處理(例如輻射)來(lái)增強結合能力,輻射會(huì )破壞一定數量的苯環(huán),產(chǎn)生羧基(COOH)和羥基(OH)基團。這些基團的存在為親水相互作用提供了機會(huì )。以這種方式改性的微孔板通常稱(chēng)為高結合。所得表面主要是疏水性的,具有間歇性羧基和羥基,能夠與生物分子上帶正電的基團發(fā)生離子相互作用。

  聚丙烯(PP)是一種由丙烯單體制成的低密度、抗應力熱塑性塑料。這種線(xiàn)性烴樹(shù)脂的化學(xué)式為(C3H6)n。它是由意大利科學(xué)家在20世紀50年代中期發(fā)現的,如今已成為繼聚乙烯之后產(chǎn)量第二大的塑料。

  聚丙烯是一種熱塑性材料,因此,它可以加熱到熔點(diǎn),冷卻,然后再次加熱,而不會(huì )發(fā)生任何明顯的劣化。這種特性,加上它在高溫下液化而不是燃燒的能力,是使聚丙烯成為注塑等制造應用的熱門(mén)選擇的兩個(gè)關(guān)鍵屬性。這種材料的其他一些特性包括:

  耐化學(xué)性:聚丙烯耐稀堿和酸,非常適合用作盛放清潔溶液等液體的容器。

  韌性聚丙烯在有限的撓度范圍內具有彈性,但它也可以被視為一種堅韌的材料,因為它在變形過(guò)程的早期經(jīng)歷塑性變形。韌性是指材料吸收能量和彎曲而不開(kāi)裂的能力。

  絕緣:聚丙烯具有高電阻,使其成為電子元件的理想選擇。

  由于其耐化學(xué)性、耐細菌性和耐蒸汽滅菌性,聚丙烯還用于各種實(shí)驗設備,以下是聚丙烯(PP)比較適合的實(shí)驗類(lèi)型:

  細胞培養:聚丙烯培養皿、培養瓶等,因為其耐高溫、耐腐蝕、不易吸附細胞,可以用于細胞培養、培養基儲存等。

  離心管:聚丙烯離心管耐高溫,可在高轉速離心機中使用,適合樣品處理、離心分離等實(shí)驗。

  移液管:聚丙烯移液管耐化學(xué)腐蝕,可用于吸取各種液體,并且可以進(jìn)行高溫高壓消毒。

  PCR管:聚丙烯PCR管耐高溫,可以在PCR儀中使用,適合核酸擴增實(shí)驗。

圖2 96 孔 PCR 微孔板


  其他:聚丙烯材質(zhì)還可用于制作其他實(shí)驗器材,例如,滴瓶、試劑瓶、培養皿等。

  需要注意的是,聚丙烯的透光率低,不適合光學(xué)檢測實(shí)驗,例如,比色法、熒光法ELISA等。上述為大家介紹比較常見(jiàn)的酶標板材質(zhì),其它的因為時(shí)間關(guān)系,暫時(shí)不介紹,不過(guò)非常喜歡和大家一起交流和分享提高實(shí)驗的效率。

  根據孔型分類(lèi)


  1、孔數

  微孔板孔數分為96、48和384孔。實(shí)驗中比較常用的96孔,目前市面上大多數酶標儀兼容96孔。

  2、孔底

  根據微孔板底部分為平底、U型底、V型底。平底折射率較低,適合在酶標儀上檢測;U型底的酶標板折射率較高,方便加樣、混勻等操作;V型底部的ELISA板可以準確吸取樣本。

  3、顏色

  微孔板通常有四種顏色:透明、黑色、白色和灰色。根據所用的檢測模式,當非常亮和暗的樣本相鄰時(shí),顏色可能會(huì )影響信號與背景的比率和孔與孔之間的串擾。因此,顏色選擇不當可能會(huì )對您的數據產(chǎn)生負面影響。

  吸光度測定需要使用透明(包括紫外線(xiàn)透明)微孔板,因為在此檢測模式下,光必須穿過(guò)樣品。

圖3 透明色微孔板


  黑色微孔板(由于碳的存在而變暗)會(huì )部分抑制樣品的信號。這是因為黑色會(huì )部分吸收來(lái)自樣品的光信號。因此,這些板非常適合熒光強度(包括FRET)和熒光偏振測定。這些通常是具有強信號產(chǎn)量的檢測模式,使用黑色有助于減少背景、自發(fā)熒光和孔間串擾,從而提供更好的信號空白比。

圖4 白色微孔板

  黑色微孔板通常不推薦用于發(fā)光、時(shí)間分辨熒光(TRF)和TR-FRET檢測,因為這些檢測模式通常具有相對較低的信號產(chǎn)量,并且會(huì )被黑色進(jìn)一步淬滅。建議使用含有二氧化鈦的白色微孔板進(jìn)行這些檢測??椎陌咨糠址从沉藰悠沸盘?,有助于最大化樣品信號。缺點(diǎn)是白色微孔板也會(huì )增加空白信號。然而,這在發(fā)光檢測中通常很低。在TRF中,延遲測量窗口消除了背景的影響。

圖5 黑色微孔板


  介于黑色和白色之間的中間解決方案是灰色微孔板。這些微孔板特別推薦用于A(yíng)lphaScreen®和AlphaLISA®,因為它們可以減少串擾和背景,同時(shí)仍提供良好的信號。

  4、酶標板結合力

  孔的表面特性起著(zhù)重要作用。在這里,樣品和孔材料相互作用。通常,微孔板主要有三種類(lèi)型:非結合或低結合、中結合和高結合。結合受材料物理特性的影響,可以通過(guò)應用不同的涂層來(lái)改變。

  對于生化光譜和高通量篩選應用,通常選擇無(wú)涂層的聚苯乙烯作為材料,并歸類(lèi)為中等結合。

  非結合板可防止核酸、蛋白質(zhì)和肽與孔表面結合。此時(shí),特定涂層可降低檢測背景并提高信噪比。

  高結合微孔板通常用于需要將分子固定在孔表面的檢測。其中最著(zhù)名的用途之一是ELISA檢測。在此,特定的涂層和處理會(huì )引入一定數量的親水基團,以促進(jìn)生物分子(例如抗體)的被動(dòng)吸附。中結合微孔板和高結合微孔板通常在可用極性基團的數量上有所不同。

  上述為大家介紹酶標板的選擇技巧,除了選擇正確酶標板之外,酶標板使用也非常重要,具體可以參考說(shuō)明書(shū),了解酶標板的注意事項。